酶催化共振散射法和流动注射化学发光法检测漆酶活怀和乙醇

摘要

第一章绪论,介绍了共振散射光谱技术与化学发光检测技术在分析化学中的应用,介绍了漆酶和乙醇脱氢酶的分析进展及其应用,综述了乙醇分析检测的进展。
　　 第二章,采用催化共振散射光谱对漆酶活力检测新方法进行了研究,结果发现在pH3.8的HAC-NaAC缓冲体系中,漆酶(Laccase)催化H2O2氧化I-生成I2,I2与过量的I-结合形成I3-,I3-与十四烷基苄基二甲基氯化铵(TDMAC)阳离子表面活性剂结合形成(TDMA-I3-)n缔合物微粒,该微粒导致468 nm的共振散射强度显著增强。在选定的条件下,随着漆酶浓度的增加,468 nm处的共振散射峰增强,漆酶的酶活力在O.08～0.96 U／mL范围内与ΔI468nm呈现良好的线性关系。其线性回归方程、相关系数分别为ΔI468nm=88.8Ulaccase-1.9,检出限为0.02 U／mL。该法用于漆酶的酶活力测定,结果令人满意。
　　 第三章,在pH8.4 Tris—HCl缓冲溶液中,乙醇脱氢酶(ADH)催化乙醇与氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)反应生成乙醛:在酸性条件下,乙醛还原氯金酸所生成的金颗粒在600 nm处有-共振散射峰。在选定条件下,随着乙醇浓度的增大600 nm处的共振散射峰线性增大。乙醇浓度C在0.068～10.2 mmol／L范围内与共振散射信号增大值ΔI600nm成良好线性关系,其回归方程为ΔI600nm=35.562 C+10.865,线性系数为0.9980,检出限为3.2μmol／L。该法用于饮料中乙醇的测定,结果令人满意。
　　 第四章,在pH8.4 Tris-HCl缓冲溶液中,乙醇脱氢酶(ADH)催化乙醇与氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)反应生成乙醛:在酸性条件下,乙醛还原氯金酸生成纳米金颗粒,体系中剩余的氯金酸对鲁米诺-双氧水化学发光体系具有增强效应。在选定条件下,随着乙醇浓度的增大,反应剩余的氯金酸减少,催化效果减弱,化学发光信号值减小,从而可以利用化学发光法间接地检测乙醇的含量。乙醇浓度C在0.017～5.10 mmol／L范围内与化学发光信号减小值ΔI成良好线性关系,其回归方程为ΔI=2374.3C+280.1,检出限为2.3μmol／L。该法用于酒后唾液中乙醇的测定,结果令人满意。