影响农杆菌介导草菇遗传转化的因素研究

摘要

以草菇Volvariella volvacea菌株V51为受体材料,用农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导法转入抗冷冻蛋白基因(afp),探索不同的转化受体、农杆菌种类、乙酰丁香酮(AS)的浓度、共培养的温度、时间等因素对转化效率的影响,并采用PCR及Southern杂交检测afp基因是否整合到草菇的基因组中.结果表明:以D_(660 nm)为0.15的EHA105为侵染的农杆菌菌株,加入200 μmol/L AS进行预培养,侵染菌丝球后转入含有AS为200 μmol/L的IMA培养基上,28 ℃,共培养60 h为最佳转化条件.PCR与Southern杂交结果证明afp基因已整合到草菇的基因组中.