siRNA靶向Rac1真核表达载体的构建与效应检测

摘要

目的构建、纯化并鉴定Rac1特异性siRNA的真核表达载体,并在HeLa细胞中初步检测其转染率及对Rac1基因的抑制率。方法体外合成含针对人、鼠的Rac1特异基因序列的siRNA链,定向克隆至pSUPER质粒中,对重组质粒进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。将抽提的质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜观察转染效率,荧光定量RT-PCR法鉴定其抑制Rac1基因表达的效果。结果利用RNAi技术成功构建抑制Rac1表达的小干扰RNA重组载体,并成功转染到HeLa细胞中(载体转染率达到70%以上)。在mRNA水平对Rac1基因的表达产生明显抑制作用(抑制率为87%以上)。结论成功构建了针对Rac1的siRNA真核表达载体,为进一步研究Rac1的功能奠定了基础。