积雪草酸通过ROS介导的细胞凋亡抑制胃癌细胞增殖并诱导保护性自噬

摘要

cqvip:目的研究积雪草酸对BGC-823和HGC-27人胃癌细胞增殖的抑制作用,并对其作用机制进行初步探讨.方法BGC-823和HGC-27胃癌细胞中分别加入浓度为0,25,50,100μmol/L的积雪草酸处理12,24,48,72 h.MTT法检测细胞增殖的影响;流式检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡标志蛋白cleaved Caspase3、cleaved Caspase9、cleaved PARP、自噬标志蛋白LC3、P62以及线粒体和细胞质中细胞色素C的表达;ROS检测试剂盒检测ROS水平;GSH检测试剂盒检测GSH的含量.同时给与积雪草酸和ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸,采用MTT考察BGC-823和HGC-27胃癌细胞的生存率.同时给与积雪草酸和自噬抑制剂氯喹或3-甲基腺嘌呤考察自噬在积雪草酸抗BGC-823和HGC-27胃癌细胞增殖中的作用.结果MTT结果显示,积雪草酸(0,25,50,100μmol/L)作用于BGC-823和HGC-27胃癌细胞后,细胞生存率随时间和剂量依赖性地降低(P<0.05).流式结果显示,积雪草酸(0,25,50,100μmol/L)作用于BGC-823和HGC-27胃癌细胞后,细胞凋亡率明显增加(P<0.05).Western blot显示,积雪草酸(0,25,50,100μmol/L)处理BGC-823和HGC-27胃癌细胞后,cleaved Caspase3、cleaved Caspase9、cleaved PARP的表达显著上调(P<0.05).积雪草酸(0,25,50,100μmol/L)作用于BGC-823和HGC-27胃癌细胞后,细胞中的ROS水平增加(P<0.05),GSH水平降低(P<0.05).MTT结果显示,与单独积雪草酸处理相比,5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱联合50μmol/L积雪草酸处理BGC-823和HGC-27胃癌细胞生存率明显升高(P<0.05).Western blot显示,积雪草酸浓度依赖性地上调BGC-823和HGC-27胃癌细胞中LC3-Ⅱ的表达(P<0.05),并下调P62的表达(P<0.05).MTT结果显示,与单独积雪草酸处理相比,20μmol/L自噬抑制剂氯喹或25μmol/L 3-甲基腺嘌呤联合50μmol/L积雪草酸处理BGC-823和HGC-27胃癌细胞生存率明显降低(P<0.05).结论积雪草酸可通过ROS介导的细胞凋亡抑制胃癌细胞增殖并诱导保护性自噬.