重组人HIF-1α真核表达载体质粒的构建和鉴定

摘要

目的构建重组人HIF-1α真核表达载体质粒,为进行治疗性血管再生研究做准备.方法从Hela细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成cDNA.设计两对引物分别调取目的基因片段A和B,与T载体连接后转化大肠杆菌JM109,LB平板培养基筛选菌落,抽提质粒.测序正确后双酶切先后克隆进入pcDNA4/HisMaxA载体.结果获得重组的人HIF-1α真核表达载体质粒,经PCR扩增获得的目的基因分子量与预计的相同,插入pcDNA4/HisMaxA载体部位正确.结论重组的人HIF-1α,所选用的pcDNA4/HisMax可高表达目的基因,为利用其进行治疗性血管再生研究奠定了基础.