miR-122-5p对类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响及其机制

摘要

目的 研究miR-122-5p对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测正常关节滑膜细胞、RA滑膜细胞中miR-122-5p以及盘状结构域受体激酶(DDR2)的表达。实验分为阴性对照(miR-NC)组(转染mimic NC序列)、miR-122-5p寡核苷酸模拟物(miR-122-5p)组(转染miR-122-5p模拟物mimics)、miR-122-5p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-122-5p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-122-5p)组、miR-122-5p+pcDNA组(共转染miR-122-5p mimics和空载体(pcDNA))、miR-122-5p+pcDNA-DDR2组(共转染miR-122-5p mimics和DDR2过表达载体(pcDNA-DDR2)),用脂质体法转染至RA滑膜细胞。采用Western blot方法检测细胞中DDR2、P21和Survival的蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-122-5p与DDR2的结合力。结果 与正常滑膜细胞相比较,RA滑膜细胞中miR-122-5p的表达显著降低,DDR2的表达显著升高(t=27.714~48.853,P<0.001)。过表达miR-122-5p可抑制RA滑膜细胞增殖,促进其凋亡(t=16.716~121.500,P<0.001)。miR-122-5p可抑制野生型DDR2细胞的荧光活性。过表达DDR2可以逆转miR-122-5p对RA滑膜细胞的增殖抑制和凋亡促进作用(t=106.335~327.990,P<0.001)。结论 miR-122-5p可抑制RA滑膜细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与靶向DDR2有关。