丹酚酸B对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

摘要

目的探讨丹酚酸B对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的丹酚酸B(0、1、10、20、30、40和50μmol/L)处理人RA滑膜成纤维细胞MH7A,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,筛选丹酚酸B的最适作用浓度。取MH7A细胞,设置对照组(正常培养)、丹酚酸B组(加入丹酚酸B培养)与丹酚酸B+3-MA组(加入丹酚酸B和5 mmol/L自噬抑制剂3-MA共培养)。采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况;qRT-PCR检测caspase-3 mRNA相对表达水平;Western blotting检测caspase-3、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白相对表达水平。结果与0μmol/L丹酚酸B组比较,30、40和50μmol/L丹酚酸B处理的MH7A细胞增殖率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),据此选择50μmol/L丹酚酸B进行后续实验。与对照组比较,丹酚酸B组细胞增殖率、p62蛋白相对表达水平明显降低,细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05);与丹酚酸B组比较,丹酚酸B+3-MA组细胞增殖率(63.47%±1.94%vs.51.33%±4.67%)、p62蛋白相对表达水平(0.97±0.06 vs.0.20±0.02)明显升高,细胞凋亡率(21.4%±1.8%vs.30.4%±0.6%)、caspase-3 mRNA(0.83±0.06 vs.1.27±0.15)和蛋白(0.64±0.05 vs.1.10±0.09)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.29±0.07 vs.1.23±0.21)、Beclin-1(0.36±0.05 vs.1.05±0.08)蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。结论丹酚酸B可能通过诱导自噬抑制人RA滑膜成纤维细胞的增殖并促进其凋亡。