人成骨样细胞机械牵拉力敏感基因cDNA扣除文库的构建

摘要

目的:构建人成骨样细胞机械牵拉力敏感基因cDNA扣除文库.方法:对培养的人成骨样细胞Saos-2进行二维方向上的加载,细胞平均变形幅度为12%,牵拉频率为12次/min,加载12 h后提取应力作用后细胞及正常对照组细胞的mRNA,制备各自的cDNA,用基于PCR的消减杂交技术构建人成骨样细胞机械牵拉力作用下差异表达基因文库,即机械牵拉力敏感基因cDNA扣除文库,并进行初步的序列测定.结果:成功地构建出人成骨样细胞机械牵拉力敏感基因cDNA文库,库容量约为200;初步的测序结果表明文库内的基因多与应力作用下细胞发生的生物学变化有关,并成功地得到一个新的基因片段.结论:用基于PCR的消减杂交技术可以有效构建人成骨细胞样机械牵拉力敏感基因cDNA扣除文库.