人突变apoE转基因小鼠cDNA文库及削减文库的构建和基因表达特点的初步研究

摘要

apoE在血浆脂蛋白代谢和调节机体胆固醇水平中起着关键的作用.近来的研究进一步 指出它还与神经系统的生长发育,损伤修复;机体的免疫调节;以及肿瘤发生等生命现象都有密切关系.特别是发现早老性痴呆(AD)与apoE表型相关后,对apoE功能的研究更加受到关注.该室已经成功建立了apoE<,7>转基因小鼠(系).并证明突变人apoE<,7>基因在小鼠体内的表达可导致转基因小鼠寿命缩短,血浆甘油三酯和胆固醇水平升高(1.5-3倍),学习记忆 功能衰退.大体观察可见转基因小鼠了现明显的肾脏、肝、脾,或胸腺肿大,以及高肿瘤发生率.上述变化是一个多系统,全身性的病理过程,作者认为人突变apoE基因的表达是导致该病理过程的起因.因此,从分子水平研究人突变apoE基因的表达是否活化了一些新的基因或使用原有的基因表达增强,将有助于深入认识apoE基因重要的生理功能,以及增强对动脉粥样硬化,早老性痴呆,和肿瘤发生等重大疾病的认识.apoE<,7>基因的突变位点位于羧基端(Glu244,255-Lys244,255)脂质结合域(216-299),与已报道的其它突变apoE基因的突变位点不同.目前尚未见到有关人apoE基因表达和表达后在整体水平影响其它基因表达的报道.

目录

论文说明：英文缩写词表

摘要

前言

材料和方法

实验材料

实验方法

一apoE1转基因小鼠微量血简易鉴定法的建立和应用

二ApoE7转基因小鼠肾脏λgT11 cDNA文库的构建

三ApoE7转基因小鼠肾脏削减cDNA文库的构建

四细菌的转化和质粒DNA的提取

五削减文库克隆的鉴定和部分克隆的测序

结果

一微量血简易测定法鉴定F3代ApoE1转基因鼠

二ApoE7转基因小鼠肾脏λgT11 cDNA文库的构建

三ApoE7转基因小鼠肾脏削减cDNA文库的构建

四ApoE7转基因小鼠肾脏削减cDNA文库克隆的鉴定

五ApoE7转基因小鼠肾脏削减cDNA文库部分克隆的测序及同源性分析

附：部分克隆测序结果

讨论

小结

参考文献

文献综述如何获得目的基因：新方法与进展

致谢