荧光素酶生物发光报告体系的优化及在肝癌荷瘤裸鼠模型中的应用

摘要

目的 优化荧光素酶生物发光报告体系条件,提高基于荧光素酶生物发光活体成像技术在活体肿瘤研究中的检测灵敏性和应用潜力.方法 在一定数目稳定表达荧光素酶的肝癌细胞(HepG2-Luc)基础上(固定荧光素酶量)进行体外luciferin和ATP的最佳浓度优化,以此优化条件进行荷瘤裸鼠活体成像灵敏度检测和发光强度分析.结果 Luciferin的最佳浓度是1.25 mg/ml,ATP缓冲液的最佳浓度是12.5μM.活体成像实验显示,未使用优化体系时,将2×106肝癌细胞皮下注射后检测到的光强度为484645,使用优化体系进行检测的发光强度为1483024;对荷瘤裸鼠进行检测时,未使用优化体系时的实验鼠与对照鼠的信号强度比值为0.11,而优化后的比值增加为0.67,说明以此配比优化的荧光素酶报告系统能够明显提高裸鼠体内肿瘤的检出灵敏度,延长发光时间.结论 应用我们建立的荧光素酶生物发光报告体系优化方法可以显著提高肝癌荷瘤裸鼠活体成像检测的灵敏度.