脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存

摘要

目的:探讨脐带血造血干细胞库建立中的脐带血采集、分离、低温冻存的方法.方法:自1997年7月至2000年7月已冻存经过HLA配型的脐带血(cord blood,CB)3 744份.CB采自经检查符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿,经(citrate phosphate adenine dextnse, CPD-A)抗凝,用密闭式血袋采集法采集.采集后置于室温保存,18 h内处理.用羟乙基淀粉(hydroxythyl starch, HES)沉降后一次分离方法去除绝大多数红细胞及大部分血浆.采用以二甲亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)为主的冷冻保剂,冷冻保存CB.DMSO的终质量分数为10%.经序控降温后,置于-196 ℃液氮中保存.结果:分析了3 744份冻存CB,平均采集量为(93±22) ml(45～198 ml).浓缩后平均体积为(38±8) ml(30～60 ml);浓缩前后有核细胞数.浓缩前平均有核细胞数为11.2×108±5.3×108(4.5×108～45.1×108);采用HES沉降一次离心浓缩去除红细胞后的平均有核细胞数为9.7×108±4.6×108(3.1×108～30.5×108);平均有核细胞回收率为79%.质控检测40份标本细胞活率为88.2%,CFU-GM回收率和CD34+细胞计数分别为97.6%和86.4%.结论:本研究采用的CB采集、冻存及造血干细胞和病原生物检测的方法是安全有效的.