VEGF165真核表达载体的构建与体外表达

摘要

目的:体外构建血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165的荧光真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达.方法:应用RT-PCR方法从人单核细胞白血病细胞株THP-1中分离、扩增目的片段,单酶切克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构成重组质粒pEGFP-VEGF165,测序验证.通过脂质体介导质粒瞬时转染293T细胞,RT-PCR和免疫细胞化学检测VEGF165的表达.结果:通过RT-PCR获得576 bp的cDNA片段,测序结果与基因库(Genbank)中序列完全一致.转染后经RT-PCR和免疫细胞化学检测证实转染重组质粒组有VEGF165蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到VEGF的表达.结论:本研究构建了人VEGF165荧光真核表达载体pEGFP-VEGF165.并能成功地在293T细胞中表达.