大鼠OPN真核表达载体的构建和体外表达

摘要

目的:体外构建携带大鼠骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因的荧光真核表达载体,并观察其在人胚肾293T(human embryo kidney 293T,HEK293T)细胞中的表达.方法:从SD大鼠骨组织标本提取RNA,应用逆转录PCR(reversal transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)方法扩增目的片断,双酶切克隆到增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent proteins,EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中,构成重组质粒pEGFP-OPN,经酶切鉴定和测序验证.通过脂质体介导重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,并用RT-PCR检测OPN的表达.结果:成功构建重组质粒pEGFP-OPN,测序结果与GenBank中公布的序列(Genbank NM_012881)同源性为100%.将其转染HEK293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白的表达,并通过RT-PCR检测到OPN的表达.结论:本实验成功构建了大鼠OPN荧光真核表达载体pEGFP-OPN,并能成功地在HEK293T细胞中表达,为OPN的进一步研究奠定了一定的实验基础.