毕赤酵母工程菌原果胶酶的分离纯化

摘要

采用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等方法,对毕赤酵母工程菌发酵液中的原果胶酶进行了分离纯化,测定了其分子质量,并确定了离子交换层析法的最佳离子交换条件.结果表明,硫酸铵的饱和度为70%时,可以使原果胶酶的回收率达到71.9%,比活力为1 096.35 U/mg;经Sephadex G75凝胶过滤,原果胶酶回收率达到57.6%,酶的比活力提高到3 762.40 U/mg;最佳离子交换条件为:0～0.5 mol/L NaCl(缓冲体系为NoAc-HAc,pH5.8)溶液线性洗脱、Sepharose Fast Flow离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到9 743.20 U/mg,纯度为粗酶液的18.91倍,达到了电泳级;SDS-PAGE电泳结果表明,其分子质量为43.17 ku.