质粒载体pUC19在头孢哌酮抗性基因(CPZr)克隆中的应用探讨

摘要

目的:研究质粒pUC19是否为头孢哌酮抗性基因(CPZr)分子 克隆的理想载体.方法:氯化钙法将质粒pUC19转化至工程菌E.coliDH5获得pUC19转化菌 ;采用试管二倍液体稀释法进行pUC19转化菌对25种抗生素的敏感性测定;鸟枪法克隆耐药质粒p FC片段到载体pUC19获得含有CPZr的重组质粒.结果:pUC19转化菌对氨苄青霉素高度耐药 (MIC＞256μg/ml),对第一代头孢菌素中度耐药,对第二代头孢菌素中的头孢孟多耐药,而 对头孢呋新敏感,在第三代头孢菌素中只对头孢哌酮耐药(MIC,64μg/ml),对其他第三代 头孢菌素及β-内酰胺酶抑制剂均高度敏感,同时敏感性测定结果还发现pUC19转化菌对氟喹诺 酮类和氨基糖甙类抗性素均敏感.pUC19作为载体克隆到含有头孢哌酮抗性基因(CPZr)的重组 质粒少,克隆效率低,未能达到预期的目标.结论:pUC19不适合作为CPZr的克隆载体.