实时荧光定量聚合酶链反应突触后密度蛋白93基因TaqMan探针的制备

摘要

目的:制备实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)突触后密度蛋白93(PSD93)基因TaqMan探针以进一步研究PSD93表达情况.方法:采用RT-PCR法,从生后1天的SD大鼠大脑组织mRNA中扩增PSD93基因部分CDS区片段,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定及序列测定,采用TaqMan探针,以重组质粒为模板绘制标准曲线.结果:RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度113bp相符,DNA序列测序的结果与GenBank提供的已知序列(RNU50717)比较,所克隆的PSD93基因片段与其中的113bp完全相同,与PSD93基因100%同源.以重组质粒为模板绘制标准曲线,相关系数r大于0.99,反应效率为0.95,各点变异系数小于20%.结论:采用RT-PCR和T载体技术成功获得FQ-PCR PSD93基因TaqMan探针.