HER-3基因表达对HER-2阳性型乳腺癌细胞放射敏感性的影响及作用机制

摘要

目的:探讨人表皮生长因子受体-3(human epidermal growth factor receptor-3,HER-3)表达对HER-2阳性型乳腺癌细胞放射敏感性的影响.方法:使用慢病毒颗粒感染HER-2阳性型乳腺癌细胞系(AU-565、SKBR-3)构建HER-3基因敲低细胞系模型,蛋白质印迹法(Western blot)及实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测感染的效率.克隆形成实验测定不同组别乳腺癌细胞放射增敏效果.将HER-3敲低组与对照组细胞分别给予X线照射(6 Gy,6 MV,源皮距100 cm),流式细胞术测定不同组别细胞凋亡率以及细胞周期分布的变化.免疫荧光法检测细胞辐射后不同时间段的γH2AX焦点数,评估辐射后DNA损伤情况,蛋白质印迹法检测细胞周期调控相关蛋白CyclinB1的表达.结果:克隆形成实验结果显示,HER-3敲低组乳腺癌细胞放射敏感性增强.流式细胞术结果显示,HER-3敲低后,HER-2阳性型乳腺癌细胞辐射后凋亡率明显增加,细胞周期G2期分布比例提高.免疫荧光结果显示,HER-3敲低后,HER-2阳性型乳腺癌细胞γH2AX焦点数目在辐射后先增加后降低,较对照组峰值更高,降低时趋势更慢,提示HER-3敲低可增强辐射诱导的DNA损伤,减少DNA修复.蛋白质印迹法结果显示,细胞周期相关驱动蛋白CyclinB1表达降低.结论:HER-3基因敲低后一方面增加了 HER-2阳性型乳腺癌细胞辐射后DNA的损伤并减缓其修复能力,促进细胞凋亡;另一方面通过下调细胞周期蛋白CyclinB1的表达,增加G2期细胞分布,提升了放射敏感性.