EHD2与HER-2阳性乳腺癌细胞曲妥珠单抗敏感性的关系及作用机制

摘要

目的 研究EH结构域蛋白2(EHD2)对HER-2阳性乳腺癌细胞曲妥珠单抗(TZB)敏感性的影响及作用机制.方法 联合分析GEO、Kaplan-Meier plotter及TCGA数据库,筛选出与乳腺癌细胞TZB敏感性密切相关的基因EHD2.体外培养人乳腺癌细胞BT474,将其分为敏感组、抵抗组及干扰组,敏感组用PBS处理12周后转染PX459-Control载体,抵抗组用0.5、1、2、4、8、16μg·mL-1 TZB诱导12周后转染PX459-Control载体,干扰组用0.5、1、2、4、8、16μg·mL-1 TZB诱导12周后转染PX459-sgEHD2载体.CCK-8实验检测细胞的TZB半抑制浓度(IC50),实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测EHD2及其潜在下游基因血小板源性生长因子β受体(PDGFRβ)的表达.结果 GEO数据库显示,EHD2在TZB抵抗的乳腺癌细胞中表达显著上调(P<0.05);Kaplan-Meier plotter数据库分析发现,EHD2高表达与HER-2阳性乳腺癌患者预后不良显著相关(P<0.05),与HER-2阴性乳腺癌患者生存时间延长显著相关(P<0.05);TCGA数据库分析显示,乳腺癌组织中EHD2与PDGFRβ表达水平呈正相关(P<0.01).与敏感组比较,抵抗组与干扰组TZB的IC50显著升高,抵抗组EHD2、PDGFRβ的表达均显著上调,干扰组EHD2表达显著下调,PDGFRβ表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05);与抵抗组比较,干扰组TZB的IC50显著降低,EHD2、PDGFRβ的表达均显著下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EHD2可促进HER-2阳性乳腺癌细胞的TZB抵抗,其机制可能与上调PDGFRβ表达有关.