miR-106a负调控PTEN促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

摘要

目的:研究miR-106a在骨肉瘤组织和MG-63细胞中的表达水平及其对MG-63细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法:用荧光实时定量PCR法检测20对骨肉瘤和相邻正常组织及MG-63和成骨细胞hFOB 1.19中miR-106a的表达.用miR-106a mimics、miR-106a antagomir及两者相应的对照物转染MG-63细胞,然后分别用CCK-8法检测四组细胞增殖活性和FCM法检测细胞凋亡率.miR-106a mimics和mimics control与野生型或突变型PTEN 3'-UTR重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miR-106a是否与PTEN基因3'-UTR结合.利用Western blot技术检测PTEN蛋白在上述四组转染MG-63细胞和骨肉瘤标本中的表达水平.结果:与相邻正常组织(1.19 ±0.15)相比,肿瘤组织miR-106a的表达水平(2.60±0.86)显著升高;同时,miR-106a在MG-63中的表达水平(2.60±0.92)明显高于hFOB 1.19(1.19±0.39),以上差异均有统计学意义(P＜0.05).CCK-8和FCM检测结果显示,与mimics control组相比,miR-106a mimics组的增殖率明显增加,而细胞凋亡率下降;反之,miR-106a antagomir组与antagomir control组相比,增殖率前者低于后者,而凋亡率前者高于后者,上述差异均有统计学意义(P＜0.05).荧光素酶报告实验显示,miR-106a mimics和wt PTEN 3'-UTR共转染组的荧光强度值明显低于mimics control和wt PTEN3'-UTR组(P＜0.05).Western blot发现,与对照组相比,miR-106a mimics组PTEN表达下调,而miR-106a antagomir表达上调;临床标本,肿瘤组织PTEN表达明显低于正常组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-106a在骨肉瘤组织及细胞中过表达,并靶向负调控PTEN表达,促进骨肉瘤细胞增殖并抑制其凋亡,从而发挥促癌作用.因此,miR-106a可为骨肉瘤的诊治提供新的潜在分子靶点.