miR-106a下调MAP3K2抑制骨肉瘤细胞增殖的实验研究

摘要

cqvip:目的:探讨miR-106a对骨肉瘤细胞增殖的影响及机制。方法:利用Real-time PCR比较了正常成骨细胞(hFOB11.9)及三种骨肉瘤细胞(MG-63、U-2OS和HOS)中miR-106a的表达情况;将NC(negative control)、miR-106a mimics及miR-106a inhibitor分别转染MG-63细胞;转染后通过CCK-8实验、平板克隆形成实验检测miR-106a对细胞增殖的影响;通过生物信息学软件预测miR-106a的靶基因-蛋白激酶2(MAP3K2);分别构建MAP3K23'-UTR结合区野生型和突变型载体,通过荧光素酶报告基因实验检测miR-106a对MAP3K2的调控;在转染了NC以及miR-106a mimics的MG-63细胞中,利用Western blot检测MAP3K2的蛋白水平。结果:与正常成骨细胞相比,骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS和HOS中miR-106a的表达明显降低(P<0.05);CCK-8生长曲线表明,转染48、72和96小时后,与NC相比,miR-106a mimics能够显著抑制MG-63细胞的生长(P<0.05),而miR-106a inhibitor则能促进肿瘤细胞的生长(P<0.05);平板克隆形成实验也表明miR-106a mimics能够抑制MG-63的生长,miR-106a inhibitor发挥相反作用;荧光素酶报告基因实验表明转染了克隆MAP3K23'-UTR的荧光素酶质粒组中,荧光素酶活性受到miR-106a mimics的明显抑制(P<0.05),而在MAP3K23'-UTR突变组中,荧光素酶活性与对照相比无显著差异(P=0.877);与NC组相比,转染miR-106a mimics后,MAP3K2的表达明显降低(P<0.05)。结论:miR-106a可能通过下调MAP3K2的表达抑制骨肉瘤细胞的生长。