不同预处理方法对提取尿液脱落细胞mRNA质量的影响

摘要

目的 探索合适的处理尿标本的方法获得尿脱落细胞mRNA.方法 比较尿液容量、尿液标本冻存时间、处理方式对提取尿液脱落细胞RNA的产量与质量的影响,并进行qPCR的试验.结果40 ml尿液标本组及10 ml尿液标本组RNA总量均值分别为886.94±222.93 ng及211.22±62.01 ng,两组A2s0nm/A280nm比值分别为1.80±0.10和1.77±0.09;尿液标本量与RNA总量相关(f=3.604,P=0.002),不同尿液标本量RNA质量差异无统计学意义(t=0.708,P值＞0.05).实时离心提取及冰冻保存尿液7天后提取两种预处理方法RNA总量分别为886.94±945.84 ng及881.50±829.02 ng,A260nm/A280nm比值分别为1.80±0.10及1.80±0.87;RNA总量与A260nm/A280nm.比值差异无统计学意义(t=-0.221～0.085,P值均＞0.05).直接冰冻尿液标本与TRIzol保存沉渣细胞两种预处理方法RNA总量分别为637.81±525.24 ng及639.86±535.42 ng,A260nm/A280nm比值分别为1.84±0.13及1.83±0.96;RNA总量与A260nm/A280nm=比值差异无统计学意义(t=-0.47～0.293,P值均＞0.05).尿脱落细胞mRNA中可以检测到足细胞的标记蛋白WT-1,podocin和synaptopodin的基因表达.结论 尿液标本量是提取脱落细胞RNA量的关键因素,-80℃低温冻存尿标本7天或Trizol预处理冻存均对提取尿液沉渣细胞RNA数量和质量无影响.