miRNA-125a Taqman实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

摘要

目的 建立一种用于肝癌早期诊断和监测的血清miRNA-125a Taqman实时荧光定量PCR检测方法.方法 采用Trizol法提取肝癌患者血清中总RNA,以肝癌发生具有代表性的miRNA-125a基因为检测序列,分别设计逆转录引物、扩增引物和Taqman探针;构建和制备miRNA-125a重组质粒标准品,建立血清miRNA-125a Taqman实时荧光定量PCR检测方法.结果 成功构建了miRNA-125a重组质粒载体,制备了miRNA-125a重组质粒标准品,建立了血清miRNA-125a Taqman实时荧光定量PCR扩增体系.经实验验证,所设计引物具有较好的特异性,引物的最低检测限为78.125copies/μl;对17例肝癌患者血清miRNA-125a的检测结果在(1.45×102～3.52×105) copies/μl之间.结论 血清miRNA-125a Taqman实时荧光定量PCR检测方法的建立,为原发性肝癌早期诊断和监测提供一种新的分子诊断定量方法.