蜡样杆菌(Bacillus cereus)M22 Mn-SOD cDNA片断的克隆

摘要

分析不同种细菌Mn-SOD氨基酸序列的保守区域,设计一对简并引物进行RT-PCR扩增,产物经T-A载体连接转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆、测序并进行同源性分析,得到 436 bp Mn-SOD cDNA片段.根据此片段设计 5′端特异性引物,然后进行5′RACE扩增,获得Mn-SOD 5′端 387 bp cDNA片断.将 2 段序列进行拼接获得 594 bp cDNA片断,编码 172 个氨基酸.对推定氨基酸序列进行BLAST分析,结果表明其与炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)同源性为 95 %,且Gly77,Aly78,Phe86,Gln150和Asp151在已报道的Mn-SOD中均存在,构成Mn-SOD的活性中心.表明该序列为蜡样芽孢杆菌Mn-SOD的cDNA序列.