cDNA

摘要： 【目的】AP3-3属于MADS-box基因家族B类基因,参与兰科植物花被和唇瓣的形成,克隆该基因并进行启动子分析可以进一步研究该基因的生物学功能及其启动子调控作用机制。【方法】使用RT-PCR和常规PCR技术克隆铁皮石斛DoAP3-3基因及其启动子序列,进行生物信息学分析,构建启动子缺失片段与GUS基因融合表达载体,农杆菌介导转化铁皮石斛原球茎,进行瞬时表达。【结果】DoAP3-3基因cDNA长度为675 bp,编码蛋白质的分子式为C_(1129)H_(1803)N_(333)O_(347)S_(12),分子量25.98 kDa,pI为8.71,不稳定性指数40.14,GRAVY为-0.823,不存在跨膜区域,亚细胞定位预测得分为细胞核87.0%、线粒体8.7%、细胞质4.3%。启动子片段长度1885 bp,顺式作用元件含有大量的光响应元件等;3个启动子片段均可驱动GUS基因表达,表达强度为-1885~0 bp>-1604~0 bp>-750~0 bp。【结论】DoAP3-3蛋白具有碱性、亲水性和不稳定性,无跨膜结构域,亚细胞定位于细胞核中。DoAP3-3启动子可能受光照、植物激素、MYB转录蛋白等多个因素调控,具备启动活性,且随启动子缺失长度减少呈现增加趋势。

摘要： Thermopsis turcica is an endemic species of wild legume in Türkiye. The plant produces flower pistils with unusual morphological properties. The aim of this study was to determine the factors controlling the interesting feature of this plant. Particularly the controlling features of the flower meristem and the pistils that mutations in two genes and helps occurring the number of flower organs and can cause abnormalities, This study has attempted to explore the controlling feature of Thermopsis turcica, the young bud Arabidopsis CLV2, and CRC gene homologs were isolated and analyzed in different tissues. First, with total RNA isolated from the first thread degenerated primers synthesized cDNA expressions, second with a partial length cDNA cloning process made and the replicated set of analyses. The full-length cDNA of genes related to RACE analysis was carried out with the sequencing process. The real-time PCR method was applied for gene functional analyses with buds, sepals, petals and stamen and relative expression analysis of genes in the tissue of pistils. Full-length cDNA sequence for the gene CLV2 2557 bp, the encoded protein 716 amino acids, CRC 901 for full-length cDNA sequence of the gene—bp, the encoded protein 174 identified as amino acids. Alignment and phylogenetic analyses of CLV2 and CRC genes were found to be similar to other types of legumes in homologous sets. Real-time (RT-qPCR) PCR results relative to study courses with genes.

摘要： 14-3-3蛋白可以与不同蛋白质结合从而参与多种磷酸化调节的信号通路,并在生物代谢、信号转导、细胞周期控制、凋亡、蛋白质运输、转录、应激反应等方面发挥重要作用.本文用SMART RACE技术克隆获得了中华绒螯蟹14-3-3ζ基因的全长cDNA序列,14-3-3ζ 基因cDNA全长为1081 bp,包含一个744 bp的开放阅读框,其编码一个28.0 kDa的含247个氨基酸的多肽,编码的氨基酸序列包含保守的14-3-3结构域.多序列比对、系统发生关系重建和其他生物信息学分析表明中华绒螯蟹14-3-3ζ为非分泌型蛋白,不具有跨膜区域,定位于细胞质中,其分子量与已知的其他物种的14-3-3ζ蛋白分子量相近.中华绒螯蟹的14-3-3ζ序列与南美白对虾(Penaeus vannamei)、拟穴青蟹(Scylla paramamosain)等甲壳类动物的14-3-3ζ基因高度同源.选择压力分析表明中华绒螯蟹14-3-3ζ受到纯化选择,其功能可能高度保守.

摘要： 采用RACE技术克隆获得虾夷扇贝热休克蛋白90(HSP90)基因cDNA全长序列,命名为MYHSP90。序列和结构分析表明:cDNA全长2524 bp,5’-和3’-UTR长分别为67 bp,276 bp,开放阅读框长2181 bp,编码一个由726个氨基酸组成的多肽,预测分子量为83.21 kDa,理论等电点为4.81。MYHSP90氨基酸序列含有HSP90家族共有的5个签名序列,ATP酶结构域和C末端高度保守的MEEVD短肽序列。同源性及系统分析表明,MYHSP90氨基酸序列与软体动物的HSP90氨基酸序列相似性达到80%以上,与脊椎动物的HSP90-α和HSP90-β的同源性很近。qRT-PCR结果表明,MYHSP90基因在虾夷扇贝8种组织中均有表达,性腺中表达量最高,而闭壳肌中表达量最低。

摘要： 采用RACE技术克隆获得虾夷扇贝热休克蛋白90(HSP90)基因cDNA全长序列,命名为MYHSP90。序列和结构分析表明:cDNA全长2524 bp,5’-和3’-UTR长分别为67 bp,276 bp,开放阅读框长2181 bp,编码一个由726个氨基酸组成的多肽,预测分子量为83.21 kDa,理论等电点为4.81。MYHSP90氨基酸序列含有HSP90家族共有的5个签名序列,ATP酶结构域和C末端高度保守的MEEVD短肽序列。同源性及系统分析表明,MYHSP90氨基酸序列与软体动物的HSP90氨基酸序列相似性达到80%以上,与脊椎动物的HSP90-α和HSP90-β的同源性很近。qRT-PCR结果表明,MYHSP90基因在虾夷扇贝8种组织中均有表达,性腺中表达量最高,而闭壳肌中表达量最低。

摘要： 采用RT-PCR (revese transcription-polymerase chain reaction)、RACE (rapid amplification of cDNA ends)等技术,依据转录组测序结果,从拟黑多刺蚁中克隆得到与Broad-Complex (BR-C)同源的全长cDNA序列,命名为PvBR-C(登录号为MF596490.1);采用生物信息学方法对其cDNA和编码蛋白质的理化性质、蛋白质二级及三级结构、分子系统进化关系等进行预测和推断.PvBR-C基因的cDNA全长3 061 bp,包含1个1 302 bp的开放阅读框,编码由433个氨基酸组成的蛋白质.生物信息学分析表明,PvBR-C与BR-C蛋白具有高度同源性,且具有BTB和ZfH2C2结构域.RT-qPCR(real-time quantitative polymerase chain reaction)分析表明,PvBR-C在拟黑多刺蚁不同发育阶段和不同成虫品级中的表达水平差异较大,幼虫发育时期表达量最高;在不同品级成体的不同部位均有表达,但在生殖蚁的腹部和工蚁的头部高表达.由上述实验结果推测PvBR-C可能对于拟黑多刺蚁不同发育阶段虫体及不同品级成虫的调节具有特异性,对调节生殖蚁的生殖和消化功能以及工蚁的行为发挥着重要作用.

摘要： 目的 应用cDNA分子克隆测序方法,鉴定中国南方汉族1个KIR3DL3新等位基因.方法 采集1例KIR3DL3基因测序结果异常的无偿志愿捐血者的外周血样,提取mRNA并逆转录为cDNA.设计1对具有KIR3DL3基因特异性的PCR引物对cDNA进行扩增,扩增产物纯化后进行分子克隆测序.结果 经分子克隆测序,检出1个正常的KIR3DL3* 00802等位基因和1个KIR3DL3* 064新变异等位基因.KIR3DL3* 064与KIR3DL3* 00601等位基因的序列最为接近,仅有编码区存在nt1184 C＞T错义变异,导致第9外显子中的第374密码子由ACT变为ATT,所编码的苏氨酸(Thr)变为异亮氨酸(Ile).该等位基因被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名为KIR3DL3* 064.结论 cDNA分子克隆测序法能够鉴别常规测序分型中的异常结果,可用于鉴定KIR3DL3新等位基因.

摘要： 犬瘟热是由副黏病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒(CDV)引起的犬和肉食目中许多动物感染的一种高度接触性传染病.世界各地都有发生,病死率很高,可达30%～80%,是当前危害养犬业的重大疫病之一.设计一段PCR的引物快速诊断检测犬瘟热(CDV)是目前最常用的方法:针对其保守片段N蛋白,设计一段引物进行RT-PCR的快速检测,产物的大小在491 bp,与犬细小、犬肝炎无意义.

摘要： 黄麻是世界上重要的天然韧皮部纤维作物之一.然而,SSR标记的缺乏限制了黄麻的遗传改良.本研究从圆果种黄麻测序品种CVL-1的基因组、基因、CDS和cDNA中挖掘SSR信息,利用SSR Primer软件查找SSR位点,并分析其分布特征.结果表明,基于基因组序列共开发了153,242个基因组SSR,平均密度为467.20个SSR Mb–1;基于cDNA序列开发了10,747个SSR,平均密度为260.85 SSR Mb–1.大部分重复基元为二至四核苷酸,占76.91％,其中cDNA序列SSR中三核苷酸重复基元数量较多而基因组SSR中二核苷酸重复基元数量较多.对于不同类型的SSR重复基元,随着重复单元数量的增加,其基因组和cDNA的SSR分布频率呈现逐步降低特征.黄麻全基因组SSR标记鉴定,不仅可以丰富黄麻分子标记的数量,而且为剖析黄麻重要农艺性状的遗传机制奠定基础.

摘要： 采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到全长为2 265 bp的莲藕"美人红"品种的GBSS基因的cDNA序列(GenBank登录号EU938541),其中开放阅读框(ORF)长为1 848 bp,共编码615个氨基酸.用DNAman软件比对,莲藕GBSS基因cDNA与金鱼草(AJ006293)、马铃薯(EU403426)、大豆(EFl53101)、水稻(EU735072)Wx基因cDNA序列的同源性分别达61.2%、59.6%、64.2%、50.6%.对该基因编码的氨基酸序列进行Blastp分析发现.该序列与金鱼草的序列同源性最高,达到77%,与马铃薯、甘薯的同源性达到75%,与豆科植物的同源性在70%～75%,与禾本科植物的同源性在65%～70%.

摘要： 采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到全长为2 265 bp的莲藕"美人红"品种的GBSS基因的cDNA序列(GenBank登录号EU938541),其中开放阅读框(ORF)长为1 848 bp,共编码615个氨基酸.用DNAman软件比对,莲藕GBSS基因cDNA与金鱼草(AJ006293)、马铃薯(EU403426)、大豆(EFl53101)、水稻(EU735072)Wx基因cDNA序列的同源性分别达61.2%、59.6%、64.2%、50.6%.对该基因编码的氨基酸序列进行Blastp分析发现.该序列与金鱼草的序列同源性最高,达到77%,与马铃薯、甘薯的同源性达到75%,与豆科植物的同源性在70%～75%,与禾本科植物的同源性在65%～70%.

摘要： 采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到全长为2 265 bp的莲藕"美人红"品种的GBSS基因的cDNA序列(GenBank登录号EU938541),其中开放阅读框(ORF)长为1 848 bp,共编码615个氨基酸.用DNAman软件比对,莲藕GBSS基因cDNA与金鱼草(AJ006293)、马铃薯(EU403426)、大豆(EFl53101)、水稻(EU735072)Wx基因cDNA序列的同源性分别达61.2%、59.6%、64.2%、50.6%.对该基因编码的氨基酸序列进行Blastp分析发现.该序列与金鱼草的序列同源性最高,达到77%,与马铃薯、甘薯的同源性达到75%,与豆科植物的同源性在70%～75%,与禾本科植物的同源性在65%～70%.

摘要： 采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到全长为2 265 bp的莲藕"美人红"品种的GBSS基因的cDNA序列(GenBank登录号EU938541),其中开放阅读框(ORF)长为1 848 bp,共编码615个氨基酸.用DNAman软件比对,莲藕GBSS基因cDNA与金鱼草(AJ006293)、马铃薯(EU403426)、大豆(EFl53101)、水稻(EU735072)Wx基因cDNA序列的同源性分别达61.2%、59.6%、64.2%、50.6%.对该基因编码的氨基酸序列进行Blastp分析发现.该序列与金鱼草的序列同源性最高,达到77%,与马铃薯、甘薯的同源性达到75%,与豆科植物的同源性在70%～75%,与禾本科植物的同源性在65%～70%.

摘要： 本研究采用cDNA基因芯片技术检测人卵巢癌组织中表达差异基因,为早期诊断卵巢癌及判断预后提供理想标志物。

摘要： 本研究采用cDNA基因芯片技术检测人卵巢癌组织中表达差异基因,为早期诊断卵巢癌及判断预后提供理想标志物。

摘要： 本研究采用cDNA基因芯片技术检测人卵巢癌组织中表达差异基因,为早期诊断卵巢癌及判断预后提供理想标志物。

摘要： 本研究采用cDNA基因芯片技术检测人卵巢癌组织中表达差异基因,为早期诊断卵巢癌及判断预后提供理想标志物。

摘要： 本研究采用cDNA基因芯片技术检测人卵巢癌组织中表达差异基因,为早期诊断卵巢癌及判断预后提供理想标志物。

摘要： 本研究采用cDNA基因芯片技术检测人卵巢癌组织中表达差异基因,为早期诊断卵巢癌及判断预后提供理想标志物。

摘要： 本发明公开了一种重组病毒，即表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的重组新城疫病毒核苷酸序列及其在肿瘤抑制方面的应用。本发明提供的肿瘤治疗药物，具有良好的肿瘤抑制效果，同时本发明为重组新城疫病毒治疗肿瘤的提供了依据。

摘要： 本发明提供一种有效地制备降低了高表达基因来源的cDNA克隆含有率的cDNA文库的方法。在使用具有寡脱氧胸苷酸的双链DNA引物、并且以mRNA为模板的cDNA文库的制备方法中，通过使具有结合到高表达的目的基因的mRNA、且阻止由逆转录酶而引起的cDNA延伸反应的特性的探针共存，从而降低cDNA文库中高表达基因来源的cDNA克隆的比例。

摘要： 本发明公开了一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将cDNA进行PCR扩增；得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离；对分离得到的cDNA单链进行复性，形成具有具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链；将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序。本发明采用的测序方法能够更为有效地提高miRNA克隆测序的效率。

摘要： 本发明涉及甘薯扩展蛋白cDNA和使用该cDNA的高产转基因植物，具体地说，本发明公开了甘薯扩展蛋白cDNA(IbExpansin)，携带有该cDNA的植物转化载体以及包含该载体的转基因植物。使用该IbExpansincDNA制备的转基因拟南芥生长超过野生型拟南芥，借此增加了大小，并将种子产量提高到最高达3倍。这样，该基因能够用于产生高产量的转基因植物，以提高生物量和/或种子产量。

摘要： cDNA文库基础上cDNA消减杂交差异显示方法，是一种分子生物学基因克隆分析方法，属于分子生物学领域。它是利用cDNA文库载体的限制性内切酶酶切位点，酶切选代表制备两文库扩增子，进行两文库扩增子间的双向一轮消减杂交，在各自一轮差异产物间进行双向二轮消减杂交，两轮差异产物标记同位素后引入mRNA差异显示技术进行差异分析。该方法为cDNA文库提供了新的应用前景，为克隆低丰度弱差异的基因提供了有效的手段。

摘要： 本发明公开了一种从生物中批量分离基因全长cDNA的方法。该方法包括如下步骤：1）提取生物总RNA；2）将总RNA反转录得到双链cDNA，将所述双链cDNA与文库载体连接，连接产物转化受体菌，得到全长cDNA文库；3）将cDNA文库的菌液涂在向培养基中添加抗生素后得到的平板上进行培养，获得单菌落；4）批量挑取单菌落，分别进行培养，提取质粒后用测序引物进行测序，从每个单菌落中获得所述生物的一个基因的全长cDNA序列。实验证明，本发明所提供的从生物中批量分离基因全长cDNA的方法，减少了传统方法通过EST序列进行RACE的成本，可快速分离到大量未知基因组物种的基因全长cDNA序列。本发明对反向遗传学研究中筛选基因及其功能研究具有较大的实际应用价值。

摘要： 本发明公开了一种重组病毒，即表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的重组新城疫病毒核苷酸序列及其在肿瘤抑制方面的应用。本发明提供的肿瘤治疗药物，具有良好的肿瘤抑制效果，同时本发明为重组新城疫病毒治疗肿瘤的提供了依据。

摘要： 本发明提供一种有效地制备降低了高表达基因来源的cDNA克隆含有率的cDNA文库的方法。在使用具有寡脱氧胸苷酸的双链DNA引物、并且以mRNA为模板的cDNA文库的制备方法中，通过使具有结合到高表达的目的基因的mRNA、且阻止由逆转录酶而引起的cDNA延伸反应的特性的探针共存，从而降低cDNA文库中高表达基因来源的cDNA克隆的比例。

摘要： 本发明公开了一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将cDNA进行PCR扩增；得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离；对分离得到的cDNA单链进行复性，形成具有具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链；将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序。本发明采用的测序方法能够更为有效地提高miRNA克隆测序的效率。

摘要： 本发明涉及甘薯扩展蛋白cDNA和使用该cDNA的高产转基因植物，具体地说，本发明公开了甘薯扩展蛋白cDNA(IbExpansin)，携带有该cDNA的植物转化载体以及包含该载体的转基因植物。使用该IbExpansincDNA制备的转基因拟南芥生长超过野生型拟南芥，借此增加了大小，并将种子产量提高到最高达3倍。这样，该基因能够用于产生高产量的转基因植物，以提高生物量和/或种子产量。