人氨肽酶N基因克隆和原核表达

摘要

目的:构建人氨肽酶N(APN)-谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白(APN-GST),并进行原核表达. 方法:根据人APN mRNA序列设计合成特异性引物,从人肝组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链,RT-PCR扩增人APN基因,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX-4T,转化宿主菌BL21(DE3)细胞,异丙基锍基半乳糖(IPTG)诱导表达APN蛋白.包涵体经尿素变性、重折叠和亲和层析纯化. 结果:重组质粒测序和酶切结果显示:APN基因已正确插入pGEX-4T,重组蛋白及纯化产物SDS-PAGE在135000处有一条明显的蛋白表达条带. 结论:人APN基因已被成功地克隆、表达和纯化.