靶向Id-1基因的RNA干扰对人矽肺癌细胞增殖的影响

摘要

目的 探讨RNA干扰技术沉默Id-1基因表达后对矽肺癌细胞株增殖能力的影响.方法 针对Id-1基因mRNA靶向设计合成短发夹RNA,构建重组pGFU6、neo质粒,重组质粒转染矽肺癌YTLMC-90细胞株.反转录聚合酶链式反应检测转染后Id-1基因的转录;免疫印迹法检测Id-1,核转录因子NF-kB/p50、NF-kB/p65,Bc1-2,Bax,环氧合酶-2,c-Myc基因,血管内皮细胞生长因子,增殖细胞核抗原,β-actin基因的表达;流式细胞术检测细胞周期的变化;3H-胸腺嘧啶核苷掺入法、四氮唑蓝法和克隆形成实验检测细胞的增殖活力.结果 重组质粒经酶切和测序鉴定,证明靶基因序列正确,质粒构建成功;反转录-聚合酶链式反应和免疫印迹法检测结果表明,矽肺癌细胞转染重组质粒后Id-1基因mRNA转录和蛋白合成都明显下降,Bc1-2、环氧合酶-2、c-Myc、增殖细胞核抗原、血管内皮细胞生长因子等与增殖相关基因表达量下降;细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞明显减少;细胞活力降低,增殖受到抑制.结论 构建的重组质粒能靶向沉默Id-1基因,并抑制YTLMC-90细胞株的增殖能力,因此Id-1基因可以作为人矽沉着病并发肺癌基因治疗的候选靶点.