水稻土壤宏基因组中的β-葡萄糖苷酶基因克隆、表达及酶活的研究

摘要

β-葡萄糖苷酶（Ec3.2.1.21）属于糖苷水解酶家族3，它能够水解非还原性末端的β-D葡萄糖苷键，释放出游离的葡萄糖及相应的配基。β-葡萄糖苷酶是纤维素降解中的关键酶，对于可再生资源纤维素的利用具有十分重要的意义。本研究从水稻土壤中分离得到β-葡萄糖苷酶基因pds5，将其克隆到表达载体pET32a（＋）中，转化BL21大肠杆菌中，并诱导表达该基因。重组BL21大肠杆菌用IPTG诱导后，所提取的酶蛋白具有β-葡萄糖苷酶的活性，经SDS-PAGE分析，确定其相对分子质量为83 kD。通过控制pH和温度的方法，测得该酶酶活最适pH为7.0，最适温度为37.5℃。