酶活

摘要： 以堇叶碎米荠(Cardamine violifolia O.E.Schulz)作为研究材料,以氯化镉(CdCl2)的不同浓度(0、50、100、150、200 mg/L)处理50 d苗龄的堇叶碎米荠,测定其株高、鲜重、过氧化氢酶(CAT)活性、过氧化物酶(POD)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果表明,当镉盐浓度高于50 mg/L时,镉对堇叶碎米荠的株高和鲜重都有显著的抑制效应;随着镉盐浓度的升高,堇叶碎米荠的叶绿素a、叶绿素b、叶绿素和叶绿素a/b下降;随着镉盐浓度的升高,堇叶碎米荠叶片和根系体内的保护酶活性先升高后降低,当镉盐浓度为150 mg/L时,各保护酶的活性达到最大。结果表明,堇叶碎米荠为资源植物,可作为土壤和水体镉污染的指示植物。

摘要： 目的:调查小白芨内生真菌的多样性及产酶情况,为植物内生真菌的研究及开发提供科学依据。方法:用三点种植法进行内生真菌分离纯化,用形态鉴定和ITS序列分子鉴定方法对菌株进行鉴定,用透明圈法观察菌株产活性物质情况。结果:通过分离,获得2株内生真菌,具有较好的产酶特性,经分子鉴定分别是青霉属雷斯青霉(Penicillium raistrickii)M15和青霉属波兰青霉(Penicillium polonicum)PDAX2。结论:小白芨中含有丰富的内生真菌,对其生长发育和适应性生存具有重要意义,具有一定的开发利用前景。

摘要： 后熟是粮食的特性之一,在后熟过程中,粮食籽粒会发生生理生化活动,其加工品质及食用品质在后熟完成后一般会改善,然而目前关于我国主要粮食作物之一稻谷的后熟研究较少。为探究籼稻的后熟期时长、后熟期间的具体活动状态、后熟期内的品质变化规律,实验以6种优质籼稻(隆两优534、黄华占、郢香丝苗、粤农丝苗、虾稻1号、A优442)为原料,在后熟期内定期对其品质进行检测,包括测定其生理生化指标(发芽率、电导率、出糙率、脂肪酸值)、糊化特性指标和不同酶活性(过氧化物酶、过氧化氢酶、α-淀粉酶)。结果表明,六类优质籼稻具有不同后熟时长,后熟期间6个品种优质籼稻的发芽率整体呈上升趋势,电导率呈波动的先上升后下降的趋势,出糙率呈波动上升趋势,脂肪酸值呈波动的先下降后上升趋势,过氧化物酶品种间有变化趋势的差异但整体呈波动下降趋势,过氧化氢酶活性除A优442外整体呈波动上升趋势、α-淀粉酶活性除黄华占以外呈现波动下降趋势,峰值粘度整体呈先波动的上升后下降的趋势。通过主成分分析进行品质评价,得分由高到低分别是A优442、隆两优534、虾稻1号、粤农丝苗、郢香丝苗、黄华占。

摘要： 采用酶活测定、紫外光谱探讨了稀土钕离子对胰蛋白酶活性的影响及其机理。实验结果为:不同浓度的稀土钕离子对胰蛋白酶的活性具有抑制作用;紫外吸收光谱检测结果显示稀土钕离子可影响胰蛋白酶的立体结构。实验结果说明稀土钕离子可抑制胰蛋白酶的活性,抑制机理可能是稀土钕离子可改变胰蛋白酶的立体结构,使酶活性丧失。

摘要： 为实现漆酶基因稳定高效的异源表达,利用基因工程技术构建同源整合表达载体pGQLR,删除其来自原核的DNA序列后电转化至产朊假丝酵母菌(Candida utilis,C.utilis),构建一株表达漆酶的产朊假丝酵母工程菌ZHQX1,并对其遗传稳定性和酶活进行评价。ZHQX1在连续传代100代时外源基因仍稳定存在,保持了良好的遗传稳定性,培养96 h时其漆酶酶活是同时期原始菌—云芝栓孔菌酶活的4.8倍,达到1078.9 U/L。

摘要： D-阿洛酮糖是D-果糖在C-3位的差向异构体,由于较低的热量和与蔗糖相似的甜度,D-阿洛酮糖成为一个具有发展前景的功能性甜味剂。D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,EC 5.1.3.30,DPEase)能够催化D-果糖生产D-阿洛酮糖,这种生物酶法制备的功能性甜味剂D-阿洛酮糖由于简单的纯化步骤和高产物浓度等优点受到关注。该研究对1株前期构建的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 1A751/pUB-P43dpe-dal产DPEase进行了3 L发酵罐水平培养,通过优化溶解氧(DO)、pH、温度、初始碳源质量浓度确定最适发酵条件为:DO为30%、pH 6.0、温度37°C、初始葡萄糖质量浓度15 g/L,最高发酵酶活达78.3 U/mL。在此基础上进行补料发酵优化,得到最适补料条件为:在发酵5 h进行补料,碳源补料速率8.0 g/(L·h),在此条件下,发酵9 h全细胞酶活高达123.0 U/mL。此发酵策略为扩大工业化生产提供了参考。

摘要： 为探究海洋毒性监测模式物种-汤氏纺锤水蚤对新型环境污染物纳米银的毒性响应机制,本文研究纳米银暴露后各个时间段对水蚤产卵量、卵孵化率、排便量、超氧化物歧化酶酶活以及水蚤Hsp70及Ferritin基因表达水平影响。纳米银作用下汤氏纺锤水蚤急性及半慢性EC_(50)分别为0.67 mg·L^(-1)、0.2 mg·L^(-1)。根据半慢性EC_(50)进行纳米银慢性毒理试验,研究发现汤氏纺锤水蚤产卵量、孵化率及排便量会呈现持续下降趋势。纳米银胁迫初期对水蚤机体造成损伤,与对照组相比,SOD酶活、Ferritin及Hsp70基因均有显著低量表达(P<0.05),但纳米银毒性积累至一定量后,可能会造成不可逆的损伤,表现为SOD酶活、Ferritin及Hsp70基因表达量随着时间增加呈现先上升后下降的趋势。因此,汤氏纺锤水蚤对纳米银胁迫响应具有浓度效应以及时间效应。

摘要： 【目的】为探索马铃薯糖苷生物碱(TGA)对枸杞根腐病的诱抗效应,明确其诱抗作用最佳质量浓度,最佳间隔期与持续时间以及对枸杞多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)等抗性相关酶活性的影响。【方法】试验以宁杞1号枸杞盆栽苗为材料,分别用浓度0.3125、0.6250、1.2500、2.5000、5.0000 g/mL的TGA根茎注射处理5d后,接种1×10^(6)个/mL浓度的腐皮镰刀菌(Fusarium solani)菌悬液,于接种后第20天调查枸杞叶片和根部病情指数。【结果】TGA不同供试浓度对枸杞根腐病均具有一定的诱抗效果,与对照相比,以2.5000 g/mL TGA诱导处理后的枸杞叶片和根部病情指数最低;在此最佳供试浓度下诱导处理枸杞后,其最佳诱导间隔期和诱导抗病持续期分别为10 d和30 d;通过TGA处理枸杞后,枸杞根部的POD、PPO、SOD、PAL活性均随诱导时间呈现先升高后降低的趋势;POD、PPO、PAL和SOD活性在TGA诱导第10 d、15 d后均所达峰值,较对照均有不同程度的提高。【结论】TGA处理可有效诱导枸杞抗根腐病,且能够诱导枸杞产生系统抗病性,其诱抗效应与其激活枸杞抗性相关酶活性有关。

摘要： 从土霉素生产菌渣中筛选出两株耐土霉素的霉菌M-1、M-2,对两株菌的酸、碱及土霉素的耐受性进行了研究,并以土霉素生产菌渣作为主要培养基成分,对其培养条件进行优化,同时考察两种菌株的产蛋白酶能力以及对土霉素生产菌渣活性成分的转化能力。结果表明:两种菌株在pH 3~7的培养基中均生长良好,其中霉菌M-1的耐酸性优于菌株M-2;1800 u/mL以下的土霉素浓度对两种菌株的生长没有产生明显的抑制作用;以5%菌渣悬浮液为培养基对菌株进行培养时,两种菌株均表现出较好的产蛋白酶特性,菌株M-1在最优培养条件下其产蛋白酶活力达到99.33 u/mL,菌株M-2达到44.41 u/mL;经菌株M-1发酵处理的菌渣蛋白质转化率达到12.79%,菌株M-2的蛋白质转化率也达到了3.65%;菌株M-1和M-2的最优菌渣转化条件分别为40 mL/250 mL装液量,菌渣添加量为10%,5%接种量,pH值6.0,30°C,摇床转数160 r/min培养168 h;100 mL/250 mL装液量,菌渣添加量为5%,接种量为9%,pH值6.5,30°C,摇床转数160 r/min,培养144 h。

摘要： 基于高效液相色谱法测定产物阿魏酸含量的方法,建立了阿魏酸酯酶酶活力的测定方法。实验采用ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,Agilent),以甲醇∶1%乙酸=70∶30作为流动相,等度洗脱(柱温35°C,流速1.0 ml/min,进样量10μl),在254 nm下测定阿魏酸含量。结果表明,该法测定酶反应产物阿魏酸含量的检测限为69.15μg/L,定量限为234.78μg/L,且在10~100 mg/L范围内呈良好的线性关系,R^(2)=0.9999,重复性RSD小于1%,加标收回率为99.25%。在此基础上进一步确定阿魏酸酯酶酶活力测定时的酶反应终止液为30%的乙酸溶液。当阿魏酸生成量在15~25 mg/L时,酶反应处于动力学上的线性区。试验待测酶样的最适温度为55°C,最适pH5.0。经检验,该酶活力检测方法的精密度RSD小于3.0%,达到酶活力检测要求。

摘要： 采用半胱氨酸-咔唑法测定发酵粗酶液中葡萄糖异构酶的酶活,确定了半胱氨酸—咔唑法测定葡萄糖异构酶酶活的最佳酶促反应条件为pH值8.0、温度70°C、反应时间75min。

摘要： 以猪粪为发酵原料,研究消毒剂福尔马林对沼气发酵的影响。研究结果表明,消毒剂福尔马林对沼气发酵有抑制作用,使沼气发酵体系的挥发性总脂肪酸含量和脂肪酶活性增加,α-淀粉酶和纤维素酶的活性降低,产气量下降。随着添加量增加,这种变化趋势增强,当添加量达到0.05%时,挥发性总脂肪酸含量增加18.78%,脂肪酶活性提高135.13%,α-淀粉酶和纤维素酶的活性分别下降78.57%和83.65%。研究结果从机理上解释了养殖场粪污进行沼气发酵处理时,出现产气量下降甚至不产气的原因。可为养殖场粪污沼气发酵处理提供一定的技术指导,以保证沼气发酵的正常进行。

摘要： 试验研究了双孢白蘑菇干燥前微波与高温瞬时蒸汽对多酚氧化酶(PPO)活性以及Vc的影响。通过微波强度(W／g)、微波处理时间(t1)、蒸汽强度(Pa/g)、蒸汽处理时间(t2)的单因素试验，设计正交试验，对PPO、Vc进行综合评价分析，得出最佳的试验条件：微波强度为5．656 w/g、微波处理时间(t1)为120s、蒸汽强度为2．69 Pa/g、蒸汽处理时间(t2)为80s，综合评分值最高。并对微波与高温蒸汽联合漂烫最优结果与热水漂烫处理、纯微波、纯高温蒸汽漂烫进行了比较，体现了微波与高温蒸汽联合漂烫的优势。

摘要： 聚乙烯醇降解酶是一系列能够催化降解PVA的酶的统称，可以高效分解织物上的PVA浆料，显著降低退浆废水的处理成本。本文主要从酶活方面对PVA降解酶粗酶液的酶学性质做了基本研究，并将该酶用于纯PVA上浆的棉织物退浆过程中。实验结果表明，PVA降解酶的适宜反应条件为pH=7-8、T=30°C、反应时间t=3h，而且PVA降解酶可对PVA进行降解。当采用PVA降解酶退浆时，浆液中PVA含量与棉布上残留PVA量和小于100％，而采用缓冲液和热水退浆，PVA总量变化不大。

摘要： 由废木质纤维素生产燃料乙醇对于解决环境污染和石油短缺问题具有战略意义。纤维素酶的利用是扩大废木质纤维素的利用和增加废木质纤维素制乙醇的可行性的一条有利途径。本文概述了纤维素酶的分类，作用机制和其在废木质纤维素制可还原糖中的应用。包括纤维素酶的产酶菌种和制备，以及其酶活的提高方法。

摘要： 研究了8株菌的生长及产酶情况,从而确定了4种组合方式;通过比较4组混合菌的酶活大小,最终确定组合2为降解纤维素效果最好的混合菌。优化混合菌的最佳发酵条件为：接种量8％,250mL三角瓶装量100mL,玉米芯和麸皮为碳源(4∶1),酵母膏为氮源,碳氮比4∶1,起始pH5.0,30°C 150r／min恒温震荡培养7d。FPA酶活达到281.6U／mL,分别是出发菌的2.67倍和2.74倍。

摘要： 确定了快速测定红曲霉谷氨酸脱羧酶(GAD)酶活的测定方法一比色法。得到GAD酶活的适宜反应底物体系为:0.1mol/L的柠檬酸缓冲液,pH5.0,内含50mmol/L底物L-谷氨酸钠(L-MSG)、0.1mmol/L5'-磷酸吡哆醛(PLP):测定方法为:200μL底物溶液和100μL酶液于37°C水浴中反应一定时间(根据活力火小反应0.5～20h不等),在冰浴中加入200μL、0.2mol/L、pH9.0的硼酸盐缓冲液终止反应,再加入1.0 mL新鲜配制的6％苯酚和400μL次氯酸钠溶液并充分振荡,置于沸水浴中反应10 min,迅速在冰浴中冷却5min,于630nm下测定吸光值。通过细胞破碎、(NH4),SO,盐析和Sepharose CL-6B凝胶柱层析,对红曲霉GAD进行了有效的分离和纯化,纯化后酶活提高了6.56倍。采用SDS-PAGE初步断定出红曲霉GAD的蛋白分子量在67KD左右。红曲霉GAD酶液最适反应温度为30°C。在pH 4.4～4.8范围内酶活较高,红曲霉培养到第6天时GAD活性达到最高。

摘要： 本文通过刚果红染色法和DNS分光光度法对10种芽孢杆菌分泌胞外纤维素酶进行了筛选,得到一株(菌株编号为Pab02)酶活达170.948U/ml.并进一步对其发酵培养基的初始PH、发酵温度及时间进行了优化,结果显示该菌株在pH=8.0、温度37°C、时间48h条件下酶活达到358.751U/ml酶液,比优化前提高了2.1倍.

摘要： 通过单因子和正交试验研究了桔青霉生产5'-磷酸二酯酶的适宜培养基和培养条件.发酵培养基组成为:葡萄糖7.00﹪,蛋白胨0.20﹪,花生粉0.50﹪,Zn2+为0.03﹪,CaCO3为0.04﹪,KH2PO40.10﹪;培养条件为:pH5.0,接种量10﹪,装瓶量50/500,发酵温度28°C,发酵时间48h,酶活水平为340UI/mL.

摘要： 通过单因子和正交试验研究了桔青霉生产5'-磷酸二酯酶的适宜培养基和培养条件.发酵培养基组成为:葡萄糖7.00﹪,蛋白胨0.20﹪,花生粉0.50﹪,Zn2+为0.03﹪,CaCO3为0.04﹪,KH2PO40.10﹪;培养条件为:pH5.0,接种量10﹪,装瓶量50/500,发酵温度28°C,发酵时间48h,酶活水平为340UI/mL.

摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及里氏木霉纤维素酶转录抑制因子

摘要： 本发明提供活化部分凝血活酶时间测定方法。此方法包括：将被检血浆和含活化剂及25μg/mL以上的磷脂酰甘油的第1试剂混合的第1混合步骤,将第1混合步骤中得到的样品和含钙盐的第2试剂混合的第2混合步骤，和测定第2混合步骤中得到的样品的凝固时间的步骤。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体涉及高酶活的过氧化氢酶、基因以及高产过氧化氢酶的重组菌株和应用。所述过氧化氢酶CatR的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供了高酶活的过氧化氢酶及其基因，并且得到高效表达过氧化氢酶的重组菌株。通过发酵生产的重组菌株，能够高效地生产过氧化氢酶。本发明的过氧化氢酶在葡萄糖酸钠生产中得到广泛应用。

摘要： 本发明涉及一种比酶活提高的肝素酶I的定向改造酶PhHepIA259D，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1。本发明提供了两种PhHepIA259D和PhHepIS169D/A259D突变酶的设计与构建方法，新型突变酶工程菌的构建以及突变酶的高效表达的方法。与野生型相比，本发明突变酶具有更高的比酶活，有较大应用潜力，也为HepI的研究奠定了理论基础。

摘要： 本发明公开了一种饲料用葡萄糖氧化酶复配酶体系及其酶活测定方法及用途，属于酶制剂检测和应用领域。本发明提供的复配酶由葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶按照酶活配比(5.0‑11.0)：1组成。本发明通过上述两种酶的特殊配比，并配合葡萄糖氧化酶酶活测定方法中延长预热时间、改变反应温度、采用双指标判定反应终点，显著增加了葡萄糖氧化酶酶活检测方法的准确度和可重复性。同时本发明将葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶应用于饲料中，可有效去除反应过程中生成的过氧化氢，从而提高葡萄糖氧化酶活力，进而保障反应的连续顺利进行，显著提高了干物质消化率。本发明的酶活配比在葡萄糖氧化酶酶活测定和饲料应用领域中具有广泛的应用前景和较高的应用价值。

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，公开了一种提高微生物产纤维素酶的酶活的发酵培养基及其应用和产酶方法。本发明所述发酵培养基包括液体培养基和苎麻秸秆；所述液体培养基包括葡萄糖、(NH4)2SO4、尿素、蛋白胨、KH2PO4、CaCl2、MgSO4、FeSO4、MnSO4、ZnSO4、CoCl2、Tween和苎麻浸出液；所述苎麻浸出液由苎麻水煎提取获得。本发明以苎麻浸出液作为液体培养基的基质，同时优化其中的组分和辅以苎麻秸秆组成新的发酵培养基，用于黑曲霉和木霉发酵产纤维素酶时，能够显著提高纤维素酶的酶活。

摘要： 本发明适用于基因工程技术领域，提供了高等植物ACS双酶活关键位点突变制备单酶活突变体，ACS单酶活性关键位点包括保守域BOX2保守序列F‑Q‑D‑Y‑H‑G‑[LM]‑[PSKL]中的Q位点和保守域BOX4保守序列T‑N‑P‑S‑N‑P‑L‑G‑[TA]‑[TAMVIF]中的[TA]‑[TAMVIF]位点，以及C‑S裂解酶单酶活性关键位点，包括保守域ACS‑motif 5保守序列D‑F‑x(3)‑K‑N‑I‑H‑L‑[IV]‑S‑D‑E‑I‑[YF]‑[SA]‑G‑[TS]‑V‑F中的第13个氨基酸D。在拟南芥ACS7蛋白中，根据其在所有编码氨基酸中的位置，上述位点分别对应Q98、A221和T222，以及D245位点。将上述位点突变为其他氨基酸，会导致突变后的ACS蛋白只具有ACS或C‑S裂解酶单酶活性。本发明为利用基因工程方法控制乙烯参与的多项生命过程如果实成熟等提供了关键靶点，在抗逆作物分子育种中也具有广阔的应用前景和重要的经济价值。

摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及里氏木霉纤维素酶转录抑制因子70351的应用及提高纤维素酶表达量和酶活的方法。本发明提供的这种纤维素酶表达相关的转录抑制因子70351对于纤维素酶活性表达具有调节作用，通过构建该基因的敲除质粒，并用其转化宿主菌，在宿主菌中敲除转录抑制因子70351的表达可提高宿主菌的蛋白表达量和纤维素酶酶活。本发明丰富了里氏木霉纤维素酶的转录调控网络，为提高纤维素酶产量，降低纤维素酶成本，实现纤维素有效利用提高了新途径。

摘要： 本发明公开了一种具有较优β‑甘露聚糖酶和α‑半乳糖苷酶酶活比的酶液及其制备方法和应用，属于微生物培养技术领域。该制备方法以里氏木霉为产酶菌株，以微晶纤维素和/或蜜二糖为碳源，采用发酵法生产酶液，该酶液中β‑甘露糖苷酶的酶活力不高于0.05U/mL，而且具有较优β‑甘露聚糖酶和α‑半乳糖苷酶酶活比。该酶液无需纯化即可直接水解半乳甘露聚糖制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖，可有效提高小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的得率，降低生产成本，具有非常好的应用前景。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体涉及高酶活的过氧化氢酶、基因以及高产过氧化氢酶的重组菌株和应用。所述过氧化氢酶CatR的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供了高酶活的过氧化氢酶及其基因，并且得到高效表达过氧化氢酶的重组菌株。通过发酵生产的重组菌株，能够高效地生产过氧化氢酶。本发明的过氧化氢酶在葡萄糖酸钠生产中得到广泛应用。