人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系的建立及其在化疗药物敏感性检测中的应用

摘要

目的:建立人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系,为浆液性卵巢癌患者的临床用药提供实验模型和理论依据.方法:采用Ⅱ型胶原酶消化和差速离心法分离培养人浆液性卵巢癌细胞,培养至第3代的浆液性卵巢癌细胞用于实验.倒置相差显微镜下观察卵巢癌细胞形态表现,绘制并分析细胞生长曲线.免疫荧光法检测细胞中人癌抗原125(CA125)、配对盒基因8(PAX8)和人附睾蛋白4(HE4)表达情况,对所培养原代细胞进行鉴定,同时检测胚胎干细胞同源转录因子Nanog和八聚体结合转录因子4(Oct-4)的表达情况.药物敏感性检测分为不同浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L-1)组、紫杉醇(PTX)(0、0.0625、0.1250、0.2500、0.5000 mg·L-1)组、替莫唑胺(TMZ)(0、0.125、0.250、0.500、1.000 mg·L-1)组、卡铂(CBP)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L-1)组、阿霉素(DOX)(0、0.125、0.250、0.500、1.000 mg·L-1)组和褪黑素(MLT)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L-1)组,其中0 mg·L-1组为对照组,CCK-8法检测各组细胞存活率.结果:原代浆液性卵巢癌细胞接种4 h后开始贴壁,培养8～10 d生长融合成片;连续传代后细胞形态均一,生长迅速,细胞接种后2～7d为线性增长期.免疫荧光法检测细胞中CA125、PAX8、HE4、Nanog和Oct-4均呈高表达.药物敏感性检测,卵巢癌细胞对5-FU、TMZ、CBP和MLT均有较高的敏感性,与相对应对照组比较,不同浓度5-FU组、TMZ组、CBP组、MLT组及0.0625和0.1250 mg·L-1PTX组细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),且细胞存活率随药物浓度升高逐渐降低.结论:成功建立了人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系,该细胞对5-FU、TMZ、CBP和MLT具有较高的敏感性,该结果对浆液性卵巢癌患者术后化疗药物的选择有指导意义.