类弹性蛋白展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的制备和纯化

摘要

目的:利用大肠杆菌(E.coli)高效制备类弹性蛋白(ELP)展示N端脑钠肽前体(NT-proBNP)双抗原表位的重组蛋白,为低成本、高效地制备NT-proBNP检测校准品提供依据.方法:分别设计NT-proBNP第13～20位和第63～71位氨基酸残基表位,通过柔链连接上述2个抗原表位与ELP融合,获得3种融合蛋白.利用基因工程技术合成编码以上3种融合蛋白的基因并克隆到pET-28a(+)载体上,转入E.coli BL21 (DE3)自动诱导表达,利用多次可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白,并应用Western blotting和ELISA法检测其抗体特异结合表位的能力.结果:成功构建了3种ELP展示NT-proBNP抗原表位的载体,并在E.coli中表达获得相应重组蛋白.Western blotting和直接ELISA检测,ELP展示的特异抗原表位均具有良好的与相应抗体结合的能力.夹心ELISA法检测,ELP展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的蛋白浓度与450 nm处吸光度(A)值呈双对数线性剂量依赖关系(r=0.919 7,P＜0.01).结论:成功利用ELP展示NF-proBNP双抗原表位,为低成本、高效地制备出与NT-proBNP检测校准品奠定了基础.