人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

摘要

目的:从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2( CDC2),并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白.方法:从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2 cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和 XhoⅠ两酶切位点之间,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白.结果:RT-PCR扩增出约894 bp的DNA片段,与GenBank中的CDC2基因序列完全一致.经限制性内切图谱和测序鉴定,成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体.SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达.结论:从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因,并在大肠杆菌中表达.