SCIRR10截短体真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

摘要

目的:构建SCIRR 10蛋白3个截短体的哺乳动物细胞表达系统,探讨SCIRR 10蛋白的功能位点.方法:PCR扩增出SCIRR 10蛋白的3个功能截短体表达DNA序列,构建3种真核表达质粒载体pcDNA3.1/Myc-His-SCIRR 10(1-145aa)、pcDNA3.1/Myc-His-SCIRR 10(1-90aa)和pcDNA3.1/Myc-His-SCIRR 10(1-70aa).将3个表达载体质粒转染到COS-7细胞中,应用Western blotting 方法检测3个蛋白截短体的表达情况.结果:3个被截短的SCIRR 10蛋白相对分子质量分别为18 800、12 800和10 700.在COS-7细胞中可以成功表达3个SCIRR 10蛋白截短体.相对3个SCIRR 10截短体蛋白的表达量,β-tubulin蛋白无明显变化.结论:成功构建SCIRR 10蛋白3个截短体的哺乳动物细胞表达系统,通过此系统获得有生物活性的3个SCIRR 10截短体蛋白.