17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用

摘要

目的:探讨不同剂量17β-雌二醇(17β-E2)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化和骨钙素(BGP)基因表达的影响,为应用17β-E2调控MSCs向成骨细胞分化提供依据.方法:应用密度梯度离心法与贴壁筛选法分离出MSCs,连续传代3次,进行成骨细胞的诱导分化.MSCs分为对照组[单纯成骨细胞培养基(OBM)培养]和不同剂量17β-E2组(在成骨诱导分化液中分别添加0.1、1.0、10.0和100.0 pmol·L-1 17β-E2).各组细胞在第7天利用放射免疫法测定碱性磷酸酶(ALP)活性、Von Kossa染色检测钙盐沉积;第14天应用酶联免疫吸附法测定Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)水平;第21天应用实时荧光定量PCR检测BGP mRNA表达水平,采用茜素红染色及在酶标仪上560 nm波长下测定各组细胞的吸光度(A)值,定量分析成骨矿化能力.结果:应用密度梯度离心法与贴壁筛选法成功分离出MSCs,细胞呈成纤维细胞样,椭圆形核,核仁可见.传代培养的MSCs生长旺盛,保持原代细胞的形态特征.与对照组比较,不同剂量17β-E2组细胞ALP活性和ColⅠ 水平增加(P＜0.05或P＜0.01),骨基质的钙化能力增强(P＜0.05或P＜0.01),并呈剂量依赖性;100.0 pmol·L-1 17β-E2组BGP mRNA表达水平升高(P＜0.01).结论:密度梯度与贴壁筛选方法分离所得细胞为大鼠MSCs,17β-E2可增强MSCs成骨分化能力,上调BGP mRNA表达,并呈剂量依赖关系.