GST-hZimp10融合蛋白的重组及抗体制备

摘要

目的:构建pGEX-4T-1/ hZimp10重组质粒,并在大肠杆菌中表达,纯化出GST-hZimp10融合蛋白,用以制备抗hZimp10抗体.方法:采用PCR技术以pcCDNA3.1-Flag-hZimp10为模板,扩增出hZimp10蛋白N端128个氨基酸对应DNA片段,并将其与谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1进行重组,酶切鉴定后获得重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达,获得GST-hZimp10融合蛋白,纯化后将其作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体特异性.结果:经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定,确定PGEX-4T-1/hZimp10重组质粒中包含384 bp的片段,与测序结果一致,表明pGEX-4T-1/hZimp10重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳,融合蛋白成功表达,蛋白相对分子质量大小与预期相符.间接ELISA法检测抗hZimp10抗体效价可达1∶100 000以上.Western blotting法,hZimp10在LNCaP细胞中具有很高的特异性.结论:成功获得GST-hZimp10融合蛋白,且制备了抗hZimp10抗体.