日本七鳃鳗Lj-RGD3缺失突变体Lj-113人工合成序列的基因克隆与蛋白表达

摘要

目的获得突变体Lj-113的基因重组蛋白,为其与野生型活性比较打下物质基础。方法对日本七鳃鳗RGD缺失突变体Lj-113进行基因全序列人工合成,并以NdeI与HindIII为酶切位点构建于pET23b载体上,获得阳性基因重组质粒pET23b-Lj113。CaC l2法将重组质粒转化入大肠杆菌BL21表达菌中,对其进行终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达,并对表达蛋白进行组氨酸亲和层析纯化蛋白。结果成功获得七鳃鳗RGD缺失突变体的基因重组蛋白的可溶性表达。结论人工合成基因序列可通过分子克隆方法获得其蛋白的表达。