日本七鳃鳗Lj-RGD3毒素肽的3种单RGD模体突变体的克隆表达及其抑制Lewis细胞活性研究

摘要

为了评价Lj-RGD3 3个不同位点RGD模体的存在是否对该蛋白功能具有必要性及影响程度,采用全序列合成的方法合成了3种基于Lj-RGD3的RGD缺失突变体基因,并成功对其进行了pET23b载体的构建及重组蛋白的表达和纯化.将这3种分别保留第1位、第2位、第3位RGD模体的重组蛋白各命名为rLj-113、rLj-114和rLj-115.比较了这3种重组蛋白对Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并对其是否能引起Lewis肺癌细胞凋亡进行了测定.结果显示,rLj-113、rLj-114和rLj-115对Lewis的增殖半抑制浓度IC_(50)值分别为2.73,2.75,2.53μmol/L,并且以剂量依赖的方式抑制Lewis小鼠肺癌细胞的增殖;突变体蛋白还能抑制以bFGF(basic fibroblast growth factor)为趋化剂的Lewis小鼠肺癌细胞的迁移及侵袭.综上可知,rLj-RGD3蛋白的RGD模体的位置并不影响其在抗Lewis小鼠肺癌细胞的生物活性,而保留单RGD模体的突变体rLj-113、rLj-114、rLj-115仍然具有抑制Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭以及诱导Lewis细胞凋亡的生物学活性.