猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及真核表达

摘要

应用特异性引物,从猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)中扩增出HE蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pTHE.用EcoRI和Not I双酶切pTHE,回收目的基因HE片段并将其定向克隆到pPICZáA中,构建重组质粒pHCZáA HE.用BstXI酶切pPICZáA HE使其线性化,并电击转化至感受态毕赤酵母细胞GS115.PCR法鉴定阳性重组子,用1%甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果在酵母菌培养基上清中检测到相对分子量为43 kD的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的HE蛋白片段在Pichia Pastoris中获得成功表达.