花狭口蛙海南亚种皮肤cDNA文库的构建及鉴定

摘要

在两栖动物,尤其是蛙皮肤中已分离得到多种生物学活性物质.而构建皮肤cDNA文库,有助于筛选活性组分,并保存其功能基因.本试验以花狭口蛙皮肤组织为材料,根据Trizol法提取皮肤总RNA后,使用Creator?SMART?cDNA文库构建试剂盒,运用SMART技术构建文库,经反转录反应合成cDNA第一链,LD PCR法将第一链产物扩增再合成双链cDNA;经蛋白酶K和Sfi I消化后,用CHROMA APIN-400分离双链cD-NA;将合适大小的ds cDNA通过T4DNA连接酶16℃过夜孵育连接到经过相同酶切的pDNR-LIB载体中,体外包装后转染DH5α宿主菌,构建形成原始文库,进行滴度测试.研究表明,构建的花狭口蛙皮肤cDNA文库原始文库滴度为1.18×108 PFU/mL,插入片段大小不同,没有特异性,构建的文库不符合要求,不可用于大规模的功能基因分析,但可为花狭口蛙皮肤抗菌肽基因的前期研究提供借鉴.