牛蛙皮肤cDNA文库的构建与鉴定

摘要

牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联有Olido(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一链,以含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经SfiⅠ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coli XLI-Blue宿主菌,进行滴度测试和文库扩增.结果构建的牛蛙皮肤cDNA文库原始库容量为1.42×106 pfu/m L,插入片段长度在0.5～1.5 kb,重组率为89.5％,扩增后的文库滴度为1.35×109 pfu/m L,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析.