内蒙古绒山羊毛囊兴盛期皮肤cDNA文库的构建及KAP6-2 cDNA的克隆

摘要

用SMART技术构建了绒山羊 (Caprahircus)毛囊兴盛期皮肤组织的cDNA质粒文库。TrizolReagent(GIBCO/BRL)分离RNA后 ,用Oligotex (QIAGEN)提取mRNA ;以锚定引物反转录合成cDNA第一链作为模板 ,以 2个锚定引物 ,用长链PCR扩增全长cDNA双链。CHROMASPIN 4 0 0去除小片段后用SfiⅠ酶切 ,连接到SfiⅠ消化的pBluescriptⅡSK (带有SfiⅠA和B两个位点 )质粒载体中 ,转化E .coli 5α ,库容量为 1 8×10 5clones。随机挑选克隆提取质粒 ,5′测定插入片段的核苷酸序列 ,与GenBank数据库比对后发现 1个KAP6 2cDNA ,序列号为AY316 15 8。绒山羊KAP6 2由 6 75个核苷酸组成 ,编码 96个氨基酸 ,具有高甘氨酸