副猪嗜血杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

摘要

为了建立一种简便、快速、灵敏、特异的副猪嗜血杆菌(Hps)检测方法,以Hps的16S rRNA保守区域片段为靶序列,选择6个特异性区域,设计4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP.经优化反应体系、检测灵敏性和特异性,建立Hps的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.研究结果表明:该方法的最优反应体系是引物c(F3):c(FIP)或c(B3):c(BIP)为1:4、Mg2+浓度为2 mmol/L、dNTPs浓度为6 mmol/L,最低检出量为0.241 pg/μL DNA.该方法灵敏度是PCR法的100倍,且能够特异性检测出Hps,不能检测出猪链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和金黄色葡萄球菌.