葡萄霜霉病菌环介导等温扩增检测体系的建立

摘要

建立了葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测体系,为葡萄霜霉病的早期诊断和预测预报提供依据.根据葡萄霜霉病菌的rDNA-ITS全长基因序列设计合成了7对引物,建立并优化了葡萄霜霉病菌LAMP反应体系.利用该检测体系对包括P.viticola在内的14种常见植物病原真菌的基因组进行LAMP扩增,验证所建立体系的特异性,并对灵敏性进行评价.使用优化后的检测体系对田间发病叶片的总DNA基因组进行扩增,确认了所建立的检测体系的实用性.通过对比7对引物的特异性,筛选出1对特异性良好的引物.LAMP最佳反应条件为:以PVITFIP-1/PVITBIP-1和PVITF3-1/PVITB3-1为引物,反应体系中Bst DNA聚合酶含量为0.32 U·μL-1,在62℃ 反应60 min可以检出葡萄霜霉病菌DNA,其灵敏度为0.3 ng·μL-1.初步在田间使用该技术,可以检测到葡萄霜霉病菌,说明所建立的体系具有一定的实用性.构建的葡萄霜霉病菌LAMP检测体系高效,特异性强,可以用于检测田间的葡萄霜霉病菌.