circ-SFMBT 2通过miR-224-5p/USP3轴对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响

摘要

目的探讨环状RNA(circRNA)SFMBT 2(circ-SFMBT 2)通过miR-224-5p/USP3轴对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响。方法选取人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、Huh-7、Sk-Hep-1及人正常肝细胞株LO2,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测circ-SFMBT 2在5个细胞株中的表达,筛选出高表达circ-SFMBT 2的人肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株LO2进行后续实验,采用原位杂交实验检测circ-SFMBT 2在HepG2和LO2中的亚细胞定位;选取人肝癌细胞系HepG2传代培养,利用Lipofectamine 2000为转染试剂进行转染,分为circ-SFMBT 2转染对照组(circ-SFMBT 2 NC,NC组)、circ-SFMBT 2干扰组(si-circ-SFMBT 2组)、miR-224-5p过表达组(mimic组)、USP 3过表达组(si-circ-SFMBT 2+USP 3组)、miR-224-5p干扰组(si-circ-SFMBT 2+inhibitor组)、miR-224-5p和USP 3双过表达组(mimic+USP 3组),分别采用细胞增殖(CCK-8)、克隆斑点形成及Transwell实验检测6组HepG2细胞增殖和迁移能力,采用双荧光素报告实验检测circ-SFMBT 2、miR-224-5p和USP 3在HepG2细胞中彼此之间的靶向关系。结果qRT-PCR结果显示与正常肝细胞LO2比较,circ-SFMBT 2在4株肝癌细胞中高表达,差异有统计学意义(P<0.05);原位杂交实验证实circ-SFMBT 2存在于细胞质中;细胞增殖(CCK-8、克隆斑点实验)和迁移实验(Transwell实验)检测发现,si-circ-SFMBT 2组细胞增殖和迁移能力较NC组降低(P<0.05),mimic组增殖和迁移能力较si-circ-SFMBT 2+inhibitor组降低(P<0.05),mimic+USP 3组细胞增殖和迁移能力较mimic组升高(P<0.05);双荧光素实验证实miR-224-5p和USP 3是circ-S FMBT 2的下游靶点。结论circ-SFMBT 2通过miR-224-5p/USP3轴参与了对肝癌细胞增殖和迁移的调控。