O-GlcNAc糖基化修饰诱导髓核细胞自噬作用机制的体外实验

摘要

目的:观察髓核(NP)细胞O-GlcNAc糖基化修饰对其自噬的调节作用。方法:选取12周龄健康雄性SD大鼠,提取NP细胞进行分离和培养,取第二代SD大鼠NP细胞分为对照组和实验组;对照组和实验组均经过压力培养的第二代SD大鼠髓核细胞,实验组分别选用氧联乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT组)和氧联乙酰葡萄糖胺水解酶(OGA组)进行干预;采用流式细胞技术定量分析NP细胞在OGT/OGA作用后细胞存活比例,采用实时荧光定量PCR于在0 h、12 h、 24 h、36 h及48 h时对NP细胞自噬相关基因LC3B、Beclin-1和凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达。结果:随着培养时间延续,自噬空泡阳性细胞数目逐渐增加,36 h时达峰值,48 h后减少;OGA组与对照组比较,24 h、36 h及48 h时的阳性细胞比例高于对照组,凋亡细胞比例低于对照组,存活细胞比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SD大鼠NP细胞内随着培养时间的延续,NP细胞中Bcl-2基因的表达减少,Caspase-3及Bax基因的表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);随着培养时间的延续,NP细胞中LC3B与Beclin-1基因的表达增加,36 h达峰值,48 h降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:OGA能够通过抑制O-GlcNAc糖基化修饰过程来促进NP细胞自噬过程的发生,进而对NP细胞凋亡过程发挥抑制作用。