人表皮生长因子受体胞内酪氨酸激酶结构域原核表达

摘要

目的研究人表皮生长因子受体(EGFR)胞内酪氨酸激酶结构域的原核表达及纯化条件. 方法构建原核表达人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域的重组质粒pGEX/GST-EGFR-TKD,在大肠杆菌中表达目的融合蛋白,通过在尿素中变性、在梯度尿素中透析复性,经GST融合蛋白纯化,肠激酶去除GST"标签"后获得人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白. 结果限制酶切分析和测序表明成功构建重组质粒pGEX/GST-EGFR-TKD;SDS-PAGE分析表明,异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导下可以表达融合蛋白GST-EGFR-TKD,但以不溶性包涵体的形式存在.经尿素变性、梯度透析复性及去除GST"标签"后,获得重折叠的人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白. 结论在大肠杆菌中可成功表达人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白.