重组蔗糖异构酶在短短芽孢杆菌中的表达及发酵优化

摘要

对重组菌株Brevibacilhus choshinensis/pNCMO2-SI摇瓶发酵产蔗糖异构酶进行研究,进一步探讨了3L发酵罐不同发酵条件对菌体生长及产酶的影响.结果表明,摇瓶发酵后胞外酶活为50 U/mL,最优3L发酵罐培养条件为:初始碳源为葡萄糖质量浓度1O g/L,初始氮源为多聚蛋白胨、牛肉浸膏质量浓度各15 g/L,发酵温度30℃,溶氧30％,在此条件下得到的最高酶活为275 U/mL.为了探索启动子对蔗糖异构酶表达的影响,分别选取来源于枯草芽孢杆菌的启动子Papr-E,Pnpr-E,Pamy以及来源于巨大芽孢杆菌的启动子Pxyl进行研究.结果表明,使用启动子Papr-E的表达量最高.进一步优化摇瓶发酵条件,重组菌株BCpNapr-SI摇瓶发酵的胞外上清酶活为137 U/mL,在此条件下进行3L发酵罐发酵,最终发酵上清胞外酶活为485.5 U/mL,是未优化启动子的1.76倍.