在大肠杆菌中融合表达重组羧肽酶抑制剂

摘要

利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂(carboxypeptidase inhibitor from potato,CPI)活性多肽基因,克隆于表达载体pGEX-4T-1的多克隆位点中,得到重组质粒pGCPI,测序后将重组质粒转化到受体茵Escherichia coli BL21中.重组茵经IPTG诱导表达,超声波破茵后,通过谷胱甘肽sepherose FF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白,纯度大于97%.融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽-S-转移酶后得到纯度大于98%的重组CPI,ELISA鉴定产物具有免疫原性,体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异.