耐热木聚糖酶基因xyn11EM在大肠杆菌中的表达

摘要

将人工合成经密码子优化的11家族耐热木聚糖酶基因xyn11EM克隆至表达质粒pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-28a-xyn11EM.将其转化Escherichia coli BL21 (DE3),构建表达耐热木聚糖酶的重组工程茵E.coli BL21/xyn11EM.用IPTG诱导表达重组木聚糖酶Xyn11TM(reXyn11EM),酶活性可达47.5 U/mL.SDS-PAGE分析显示,reXyn11EM的表观相对分子质量为24 800.reXyn 11EM的最适反应温度为70℃,在70℃以下稳定.最适反应pH为6.5～7.0,在pH5.0～8.0范围内稳定.大多数金属离子和EDTA对该重组酶的活性影响不大.reXynl lEM的Km和Vmax值分别为7.2 mg/mL和54.7 U/mg.结果表明xyn11EM成功在E.coli中实现了异源表达,其良好的热稳定性具有较好的工业应用潜力.