间接竞争酶联免疫法测定鱼体中的亚甲基蓝

摘要

目的 建立间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)快速检测鱼体中亚甲基蓝的分析方法.方法 以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)为载体蛋白,以天青C(Azure C)为半抗原,采用戊二醛法合成免疫原Azure C-BSA,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.通过对包被浓度、抗体浓度和二抗浓度等一系列实验条件的优化,建立检测鱼体中亚甲基蓝的IC-ELISA法.结果 获得的多克隆抗体特异性强、灵敏度高,在5～400 ng/mL范围内与抑制率之间线性良好,线性回归方程为Y=0.3658X–0.1867(r2=0.9836),半抑制浓度(50％inhibition concentration,IC50)为75.4 ng/mL,检测限为8.3 ng/mL,样品添加回收率为77.2％～79.3％,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.3％～8.1％.结论 该方法灵敏度高、特异性强,可用于鱼体中亚甲基蓝的快速检测.