两株高特异性抗恩诺沙星单克隆抗体的研制

摘要

为自主研制抗恩诺沙星的高亲和力、高特异性单克隆抗体, 提供动物源食品中恩诺沙星药物残留生物学快速检验方法试剂, 利用碳二亚胺法(carbodiimide, EDC)制备恩诺沙星(enrofloxacin, ENR)的人工抗原, 免疫Balb/c小鼠, 采用PEG融合法, 通过有限稀释法筛选出抗恩诺沙星的单克隆抗体, 获得了两株抗恩诺沙星的单克隆抗体(克隆号:6A4和8D6).经过离子交换法纯化得到的抗体纯度在95%以上, 其中, 纯化后的6A4抗体在1 mg/mL时, 效价达到1.28×10-5, 8E6抗体在1 mg/mL时, 效价达到1.024×10-6.两株单克隆抗体与环丙沙星的交叉反应率为1.5%, 与其他氟喹诺酮类药物不反应.在酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)中, 6A4和8E6抗体的检测限分别为3.125 μg/kg和0.3 μg/kg.采用的半抗原合成以及单克隆抗体筛选的方法可以获得高灵敏度、高特异性的抗恩诺沙星的单克隆抗体, 经后续研究证实单克隆抗体(8E6)可以用于免疫胶体金和酶联免疫法检测食品中残留的恩诺沙星.